CHEMICAL SEQUENCING
Метод Максама-Гилберта, химический метод секвенирования ДНК — один из наиболее распространенных методов определения первичной последовательности нуклеотидов в молекуле ДНК. Вначале ДНК режется на фрагменты размером 0,6-2,0 кб, концы фрагментов метятся радиоактивной или нерадиоактивной меткой и плавятся для получения однонитчатых молекул. Радиоактивное мечение может быть изотопами серы 35S или фосфора 32P, нерадиоактивное мечение осуществляется с помощью биотиновой или флуоресцентной метки. После мечения образец ДНК разделяется на 4 аликвоты, каждая из которых подвергается химической обработке, включающей 4 типа реакций. В процессе каждой из этих реакций, идущих параллельно, происходит расщепление ДНК по одному из 4 нуклеотидов. Условия реакции выбираются таким образом, чтобы не происходило полного расщепления молекулы. В результате образуются популяции 5'-меченых фрагментов различной длины. Фрагменты, полученные в результате 4-х типов реакций, подвергаются электрофорезу в полиакриламидном геле, и затем полосы выявляются соответствующим методом в зависимости от способа мечения. На основе результатов электрофореза определяются нуклеотиды и их последовательность в исходной ДНК.