BIOTINYLATION
Биотинилирование нуклеиновых кислот — введение биотинилированных нуклеотидов (напр., dАТФ) в ДНК методом ник-трансляции, случайным праймированием (см. Праймер) или мечением 3'-конца с целью нерадиоактивного мечения ДНК. Обнаружение метки основано на высокой степени сродства авидина и/или стрептавидина к биотину (Kd=10-15М). Обычно используется фермент — авидиновый (стрептавидиновый) конъюгат, который позволяет наблюдать ферментативную реакцию при использовании хромогенных субстратов. Биотинмеченые зонды могут также использоваться при гибридизации in situ в метафазных хромосомах. Гибридные молекулы обнаруживаются методом иммунофлуоресценции с использованием антибиотиновых антител и антител с флуоресцентной меткой. Сигнал флуоресценции обнаруживается фотоаппаратом, чувствительным к низкому уровню освещения. Использование биотинилированных зондов имеет преимущества перед радиоавтографией, поскольку не требуются изотопы и сигнал может быть получен в течение нескольких часов.